Eksperimentalna dejavnost

Izolacija DNA
Dejavnost 1

Podobno kot raziskovalec Miescher lahko tudi ti izoliraš DNA. To ti bo vzelo 10 minut.

Potrebuješ:

  • polovico zelo zrele banane
  • vilice
  • dva kozarca (2 dl)
  • kuhinjsko cedilo za čaj
  • 2 dl tople slane vode (1–2 % raztopina NaCl v H2O)
  • 2–3 čajne žličke detergenta za pomivanje posode
  • 70 % alkohol etanol
  • zobotrebec

Navodila:

  1. Banano pretlači z vilicami in prelij s toliko tople slane vode, da bo v celoti prekrita.
  2. Material prelij skozi kuhinjsko cedilo za čaj v čist kozarec. Napolni ga približno do polovice.
  3. Odmeri 2–3 čajne žličke tekočega detergenta za pomivanje posode in ga nežno umešaj v zmes v kozarcu. Pazi, da ne nastanejo zračni mehurčki.
  4. Skoraj do vrha kozarca dolij etanol – dolivaj ga počasi po steni kozarca, tako da nastane ločena plast alkohola nad plastjo tekočega detergenta, vode in ostankov celic.
  5. Počakaj 3–5 minut in opazuj, kaj se dogaja. DNA se bo iz spodnjega sloja detergenta, vode in ostankov celic počasi dvignila v vrhnji, alkoholni sloj. Zdaj lahko DNA iz vrhnjega sloja naviješ na zobotrebec.

 Razmisli in odgovori na vprašanja:

  1. Ali je etanol lažji ali težji od vode? Kaj pa DNA? Odgovor utemelji.
  2. Molekula DNA v vodi ni vidna. Opazimo jo, ko se premakne v etanol. Kaj se zgodi z DNA v etanolu, da postane vidna?
Dejavnost 2

Sledi navodilom in izoliraj DNA. Kot vir celic uporabi čebulo ali jetra.

Potrebuješ:

  • 100g čebule ali jeter
  • 1–2 % raztopina NaCl v H2O
  • tekoči detergent za pomivanje posode
  • 100 ml 70 % alkohola (etanola)
  • kuhinjski mešalnik
  • grelnik
  • cedilo za čaj
  • 250-ml čašo
  • 500-ml čašo
  • zobotrebec

Navodila:

  1. 100 g čebule ali jeter zreži na koščke, stresi v kuhinjski mešalnik in prelij z 200 ml tople slane vode (1–2 odstotne raztopina NaCl v H2O). Koščki naj bodo v celoti prekriti z raztopino NaCl.
  2. Kuhinjski mešalnik vklopi za 5–10 sekund (pazi, da materiala ne utekočiniš v celoti). Nato material prelij skozi kuhinjsko cedilo za čaj v svežo 250-mililitrsko čašo. Napolni jo približno do polovice.
  3. Odmeri 2–3 čajne žličke tekočega detergenta za pomivanje posode in ga nežno umešaj v zmes v čaši. Pazi, da pri tem ne nastanejo zračni mehurčki.
  4. Dolij 100 ml 70-odstotnega alkohola (etanola). Dolivaj ga počasi po steni čaše, tako da nastane ločena plast alkohola nad plastjo tekočega detergenta, vode in ostankov celic.
  5. Počakaj 3–5 minut in opazuj, kaj se dogaja. DNA se bo iz spodnjega sloja detergenta, vode in ostankov celic počasi dvignila v vrhnji, alkoholni sloj. Zdaj lahko DNA iz vrhnjega sloja naviješ na zobotrebec.

Ob izolaciji DNA se ti bo verjetno porodilo vprašanje, zakaj uporabimo sol, mešalnik, detergent in alkohol.

Pozitivni ioni iz soli so potrebni za nevtraliziranje negativnega naboja fosfatnih skupin v DNA. Mešalnik potrebujemo, da tkivo v izhodiščnem materialu razbijemo na celice. Detergent uporabimo za raztapljanje membrane celice in jedrne membrane, kar omogoči, da se DNA sprosti. Sproščena DNA je lažja od zmesi detergenta, vode in ostankov celic in se zato dvigne v sloj alkohola, kjer se zaradi alkohola obori in tako postane vidna.

Za zelo radovedne:

  • Primerjaj delovanje mila na mastne madeže z delovanjem detergenta pri izolaciji DNA.
  • Poskusi izolirati DNA še iz kakšnega drugega izhodiščnega materiala.
  • Preveri, kako na izolacijo DNA vpliva različna slanost vode.
  • Preveri, kako na izolacijo DNA vpliva različna količina tekočega detergenta.